ምርቶች
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR ማወቂያ ኪት ለ2019-nCoV
የሚጠበቀው አጠቃቀም
ይህ ኪት ለአዲሱ ኮሮናቫይረስ (2019-nCoV) የጉሮሮ መፋቂያዎች፣ ናሶፍፊሪያንክስ፣ ብሮንሆልቬሎላር ላቫጅ ፈሳሽ፣ አክታን በመጠቀም ለአዲሱ ኮሮና ቫይረስ (2019-nCoV) የጥራት ምርመራ የሚያገለግል ነው። ለክሊኒካዊ ምርመራ እና ህክምና ማስረጃ.ስለ ሁኔታው አጠቃላይ ትንታኔ ከታካሚው ክሊኒካዊ መግለጫዎች እና ሌሎች የላብራቶሪ ምርመራዎች ጋር በማጣመር ይመከራል.
የፍተሻ መርህ
መሣሪያው በአንድ-ደረጃ RT- PCR ቴክኖሎጂ ላይ የተመሠረተ ነው።በእርግጥ፣ የ2019 አዲሱ ኮሮናቫይረስ (2019-nCoV) ORF1ab እና N ጂኖች እንደ ማጉላት ዒላማ ክልሎች ተመርጠዋል።የተወሰኑ ፕሪመርሮች እና የፍሎረሰንት መመርመሪያዎች (ኤን ጂን መመርመሪያዎች በFAM እና ORF1ab መፈተሻዎች በHEX ምልክት ተሰጥተዋቸዋል) የ2019 አዲስ ዓይነት የኮሮና ቫይረስ አር ኤን ኤ በናሙናዎች ውስጥ ለመለየት የተነደፉ ናቸው።ኪቱ በተጨማሪም የናሙና አሰባሰብ ሂደትን፣ አር ኤን ኤ እና ፒሲአርን የማጉላት ሂደትን ለመከታተል ውስጣዊ ቁጥጥር የሚደረግበትን የፍተሻ ስርዓት (የውስጥ መቆጣጠሪያ ጂን ምርመራን በCY5) ያካትታል በዚህም የውሸት አሉታዊ ውጤቶችን ይቀንሳል።
ዋና ዋና ክፍሎች
| አካላት | መጠን(48ቲ/ኪት) |
| የ RT-PCR ምላሽ መፍትሄ | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab፣N Gene፣RnaseP Gene) | 864µl |
| አሉታዊ ቁጥጥር | 1500µl |
| nCOV ፖዘቲቭ ኮንትሮ (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
የራሳቸው ሬጀንቶች፡- አር ኤን ኤ ማውጣት ወይም የማጥራት ሪጀንቶች።አሉታዊ/አዎንታዊ ቁጥጥር፡- አወንታዊው ቁጥጥር አር ኤን ኤ ሲሆን የዒላማውን ክፍልፋይ የያዘ ሲሆን አሉታዊ ቁጥጥር ደግሞ ከኑክሊክ አሲድ የጸዳ ውሃ ነው።በአጠቃቀሙ ጊዜ, በማውጫው ውስጥ መሳተፍ አለባቸው እና እንደ ተላላፊ መቆጠር አለባቸው.አግባብነት ባላቸው ደንቦች መሰረት ተይዘው መወገድ አለባቸው.
የውስጣዊ ማመሳከሪያ ጂን የሰው RnaseP ጂን ነው.
የማከማቻ ሁኔታዎች እና ጊዜው የሚያበቃበት ቀን
-20±5℃፣ ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን እና መቅለጥን ያስወግዱ ከ5 ጊዜ በላይ፣ ለ6 ወራት የሚሰራ።
የሚተገበር መሳሪያ
በ FAM/HEX/CY5 እና ሌሎች ባለብዙ ቻናል ፍሎረሰንት PCR መሳሪያ።
የናሙና መስፈርቶች
1. የሚተገበሩ የናሙና ዓይነቶች፡- የጉሮሮ መፋቂያዎች፣ ናሶፍፊሪያንክስ እጢዎች፣ ብሮንሆልቬሎላር ላቫጅ ፈሳሽ፣ አክታ።
2. የናሙና ስብስብ (አሴፕቲክ ቴክኒክ)
የፍራንነክስ ስዋብ፡- የቶንሲል እና የኋለኛውን የፍራንነክስ ግድግዳን በአንድ ጊዜ በሁለት እጥፎች ያብሱ፣ ከዚያም የናሙና መፍትሄ በያዘው የሙከራ ቱቦ ውስጥ የጥጥ ጭንቅላትን ያጠምቁ።
አክታ፡- በሽተኛው ጥልቅ ሳል ካለበት በኋላ የናሙና መፍትሄን በያዘ የሾለ ካፕ የሙከራ ቱቦ ውስጥ የሳልሰውን አክታን ይሰብስቡ።ብሮንሆልቬሎላር ላቫጅ ፈሳሽ፡ በህክምና ባለሙያዎች ናሙና.3. የናሙናዎች ማከማቻ እና መጓጓዣ
የቫይረስ ማግለል እና የአር ኤን ኤ ምርመራ ናሙናዎች በተቻለ ፍጥነት መሞከር አለባቸው።በ 24 ሰዓታት ውስጥ ሊገኙ የሚችሉ ናሙናዎች በ 4 ℃ ውስጥ ሊቀመጡ ይችላሉ;በ 24 ውስጥ ሊገኙ የማይችሉ
ሰአታት በ -70 ℃ ወይም ከዚያ በታች መቀመጥ አለባቸው (የማከማቻ ሁኔታ -70 ℃ ከሌለ ፣ እነሱ መሆን አለባቸው)
በጊዜያዊነት በ -20 ℃ ማቀዝቀዣ ውስጥ ተከማችቷል).ናሙናዎች በመጓጓዣ ጊዜ ተደጋጋሚ ቅዝቃዜን እና መቅለጥን ማስወገድ አለባቸው.ናሙናዎች ከተሰበሰቡ በኋላ በተቻለ ፍጥነት ወደ ላቦራቶሪ መላክ አለባቸው.ናሙናዎች በረጅም ርቀት ላይ መጓጓዝ ካስፈለጋቸው ደረቅ በረዶ ማከማቸት ይመከራል.
የሙከራ ዘዴዎች
1 የናሙና ማቀነባበሪያ እና አር ኤን ኤ ማውጣት (ናሙና ማቀነባበሪያ ቦታ)
ለአር ኤን ኤ ለማውጣት 200μl ፈሳሽ ናሙና መውሰድ ይመረጣል.ለተዛማጅ የማውጣት እርምጃዎች፣ የንግድ አር ኤን ኤ ማውጣትን መመሪያዎችን ይመልከቱ።ሁለቱም አሉታዊ እና አሉታዊ
በዚህ ኪት ውስጥ ያሉ መቆጣጠሪያዎች በማውጫው ላይ ተሳትፈዋል።
2 PCR reagent ዝግጅት (reagent ዝግጅት አካባቢ)
2.1 ሁሉንም ንጥረ ነገሮች ከመሳሪያው ውስጥ ያስወግዱ እና ይቀልጡ እና በክፍል ሙቀት ውስጥ ይቀላቅሉ።ከመጠቀምዎ በፊት ሴንትሪፉጅ በ 8,000 ሩብ ደቂቃ ለጥቂት ሰከንዶች;የሚፈለገውን የሪኤጀንቶች መጠን ያሰሉ እና የምላሽ ስርዓቱ በሚከተለው ሠንጠረዥ ውስጥ እንደሚታየው ተዘጋጅቷል ።
| አካላት | N አገልግሎት (25µl ስርዓት) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18µl × N |
| የ RT-PCR ምላሽ መፍትሄ | 2µl × N |
| * N = የተሞከሩ ናሙናዎች ብዛት + 1 (አሉታዊ ቁጥጥር) + 1 (nCOVአዎንታዊ ቁጥጥር) | |
2.2 ክፍሎቹን በደንብ ካደባለቁ በኋላ በቱቦው ግድግዳ ላይ ያለው ፈሳሽ በሙሉ ወደ ቱቦው ግርጌ እንዲወድቅ ለአጭር ጊዜ ሴንትሪፉፍ ያድርጉ እና ከዚያም የ 20 µl ማጉያ ስርዓቱን ወደ PCR ቱቦ ውስጥ ያስገቡ።
3 ናሙና (የናሙና ዝግጅት ቦታ)
ከተጣራ በኋላ 5μl አሉታዊ እና አወንታዊ መቆጣጠሪያዎችን ይጨምሩ.የሚመረመረው ናሙና አር ኤን ኤ ወደ PCR ምላሽ ቱቦ ውስጥ ተጨምሯል.
ቱቦውን ወደ ማጉያ ማወቂያ ቦታ ከማስተላለፍዎ በፊት ለጥቂት ሰከንዶች ያህል በ 8,000 ሩብ ደቂቃ ላይ በደንብ ይያዙት.
4 PCR ማጉላት (የተጠናከረ የማወቂያ ቦታ)
4.1 የምላሽ ቱቦውን በመሳሪያው ናሙና ሕዋስ ውስጥ ያስቀምጡ እና ግቤቶችን እንደሚከተለው ያዘጋጁ።
| ደረጃ | ዑደት ቁጥር | የሙቀት መጠን(°ሴ) | ጊዜ | ስብስብጣቢያ |
| ተገላቢጦሽግልባጭ | 1 | 42 | 10 ደቂቃ | - |
| ቅድመ-denaturativen | 1 | 95 | 1 ደቂቃ | - |
| ዑደት | 45 | 95 | 15 ሴ | - |
| 60 | 30 ዎቹ | መረጃ መሰብሰብ |
የመሳሪያ ማወቂያ ቻናል ምርጫ፡ ለፍሎረሰንስ ምልክት የ FAM፣HEX፣ CY5 ቻናል ይምረጡ።ለማጣቀሻ ፍሎረሰንት የለም፣ እባክዎ ROX አይምረጡ።
5 የውጤት ትንተና (እባክዎ ለማቀናበር የእያንዳንዱን መሳሪያ የሙከራ መመሪያዎች ይመልከቱ)
ከምላሹ በኋላ ውጤቱን ያስቀምጡ.ከመተንተን በኋላ የመነሻውን የመነሻ ዋጋ, የመጨረሻ እሴት እና የመነሻ ዋጋን በምስሉ ላይ ያስተካክሉ (ተጠቃሚው እንደ ትክክለኛው ሁኔታ ማስተካከል ይችላል, የመነሻ እሴቱ ወደ 3 ~ 15 ሊዘጋጅ ይችላል, የመጨረሻው እሴቱ ሊስተካከል ይችላል. 5 ~ 20 ፣ ማስተካከያ) በሎጋሪዝም ግራፍ ውስጥ በመስኮቱ ደፍ ላይ ፣ የመነሻ መስመሩ በሎጋሪዝም ደረጃ ላይ ነው ፣ እና የአሉታዊ መቆጣጠሪያው የማጉላት ኩርባ ቀጥታ መስመር ወይም ከደረጃው መስመር በታች) ነው።
6 የቁጥር ቁጥጥር (የሂደት ቁጥጥር በሙከራው ውስጥ ተካትቷል) አሉታዊ ቁጥጥር: ለ FAM, HEX, CY5 ማወቂያ ቻናሎች ግልጽ የሆነ የማጉያ ጥምዝ የለም
የ COV አወንታዊ ቁጥጥር፡ የ FAM እና የኤችኤክስ ማወቂያ ቻናሎች ግልጽ የሆነ የማጉላት፣ ሲቲ እሴት≤32፣ ነገር ግን የCY5 ቻናል ምንም የማጉያ ከርቭ የለም፤
ከላይ ያሉት መስፈርቶች በተመሳሳይ ሙከራ ውስጥ በአንድ ጊዜ መሟላት አለባቸው;አለበለዚያ ሙከራው ልክ ያልሆነ ነው እና ሊደገም ይገባዋል.
7 የውጤቶች ውሳኔ.
7.1 በፈተና ናሙናው FAM እና HEX ቻናሎች ውስጥ የማጉላት ከርቭ ወይም ሲቲ እሴት> 40 ከሌለ እና በCY5 ቻናል ላይ የማጉላት ከርቭ ካለ የ2019 አዲስ ኮሮናቫይረስ (2019-nCoV) የለም ተብሎ ሊፈረድበት ይችላል። በናሙናው ውስጥ አር ኤን ኤ;
.2 የሙከራ ናሙናው በ FAM እና HEX ቻናሎች ውስጥ ግልጽ የሆነ የማጉላት ኩርባዎች ካሉት፣ እና የሲቲ ዋጋው ≤40 ከሆነ፣ ናሙናው ለ2019 አዲስ የኮሮና ቫይረስ (2019-nCoV) አዎንታዊ ነው ተብሎ ሊፈረድበት ይችላል።
7.3 የሙከራ ናሙናው ግልጽ የሆነ የማጉላት ኩርባ በአንድ የ FAM ወይም HEX ቻናል ውስጥ ብቻ ከሆነ እና የሲቲ ዋጋው ≤40 ከሆነ እና በሌላኛው ቻናል ምንም የማጉላት ከርቭ ከሌለ ውጤቱን እንደገና መሞከር ያስፈልጋል።የድጋሚ ውጤቶቹ ተመሳሳይ ከሆኑ ናሙናው ለአዲሱ አወንታዊ ነው ሊባል ይችላል።
ኮሮናቫይረስ 2019 (2019-nCoV)።የድጋሚ ሙከራው ውጤት አሉታዊ ከሆነ፣ ናሙናው ለ2019 አዲስ ኮሮናቫይረስ (2019-nCoV) አሉታዊ እንደሆነ ሊፈረድበት ይችላል።
አወንታዊ የፍርድ ዋጋ
የ ROC ጥምዝ ዘዴ የኪት ማጣቀሻ ሲቲ እሴትን ለመወሰን ጥቅም ላይ ይውላል እና የውስጥ መቆጣጠሪያ ማጣቀሻ ዋጋው 40 ነው.
የፈተና ውጤቶች ትርጓሜ
1.እያንዳንዱ ሙከራ ለአሉታዊ እና አወንታዊ ቁጥጥሮች መሞከር አለበት.የፈተና ውጤቶች የሚወሰኑት መቆጣጠሪያዎች የጥራት ቁጥጥር መስፈርቶችን ሲያሟሉ ብቻ ነው።
2. የ FAM እና HEX ማወቂያ ሰርጦች አወንታዊ ሲሆኑ ከ CY5 ሰርጥ (የውስጥ መቆጣጠሪያ ሰርጥ) የተገኘው ውጤት በስርዓት ውድድር ምክንያት አሉታዊ ሊሆን ይችላል.
3. የውስጥ መቆጣጠሪያው ውጤት አሉታዊ ከሆነ, የሙከራ ቱቦው FAM እና HEX ማወቂያ ቻናሎች አሉታዊ ከሆኑ, ይህ ማለት ስርዓቱ ተሰናክሏል ወይም አሠራሩ የተሳሳተ ነው ማለት ነው, ቲ ፈተናው የተሳሳተ ነው.ስለዚህ, ናሙናዎቹ እንደገና መሞከር አለባቸው.
